健侖細(xì)菌基因組 DNA 提取試劑盒（快速型）

試劑盒組成 ： 50 (50 次)
TM Mini Column 50
2 ml Collection Tube 50
Buffer KB (Column solution) 15 ml
Buffer KBL1 (Lysis solution) 2 x 30 ml
Buffer KW1 (Wash solution) 50 ml
Buffer KW (Wash solution ) 使用前加入 50 ml 無水乙醇
Buffer KE (Elution solution) 15 ml
儲存條件： 本試劑盒在室溫（15-25 ℃）下可保存一年。

健侖細(xì)菌基因組 DNA 提取試劑盒（快速型）
產(chǎn)品特點(diǎn)：
TM Microbial Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜
技術(shù)，高效去除菌體蛋白和 RNA 等各種干擾物，提取高純度的 DNA。試劑
盒采用*的緩沖系統(tǒng)，可從包括大腸桿菌等多種革蘭氏陰性細(xì)菌中快速提
取基因組 DNA。
注意事項：
1. 實驗前準(zhǔn)備工作：在實驗開始前，詳細(xì)閱讀該手冊熟悉各步驟，并
準(zhǔn)備好所有的試劑盒組分，1.5 ml 和 2 ml 滅菌離心管，以及 37 ℃和 65 ℃
的溫浴條件。
2. KBL1 和 KW1 在低溫時可能產(chǎn)生混濁或沉淀，在 37-65 ℃溫浴片刻
即可。
3. Buffer KW *次使用前請按瓶上標(biāo)簽加入 50 ml 無水乙醇。每次使
用后，請立即擰緊蓋子。
操作步驟： 
（一）平衡吸附柱 
1. TM Mini Column 柱裝在一個 2 ml 收集管上（已備）。
加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子內(nèi)，室溫 13 000 rpm 離心 1 min，使平
衡液*流過柱子。棄收集管中的濾液，將空柱套回收集管內(nèi)。
注意：柱子不平衡，將導(dǎo)致 DNA 產(chǎn)率減少。
（二）裂解
2. 對于革蘭氏陰性菌， 取 0.5-1 ml 新鮮菌液于 1.5-2 ml 離心管中，10
000 rpm 離心 5 min 收集菌體，加入 800-1000 μl Buffer KBL1，上下混勻, 靜
置 2min 后室溫下 13,000 rpm 離心 3-5min, 棄去沉淀，上清液待轉(zhuǎn)移。
特別說明：
1） 微生物基因組 DNA 的純度取決于 KBL1 的體積和菌體的量，理論
上 KBL1 的體積越大，菌體的量越少， DNA 質(zhì)量越好。
(三) 吸附
3. 將第 2 步的上清液一次或多次轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi)，室溫下 13,000 rpm 
離心 30s，使裂解液*流過柱子。每次不超過 700 μl, 保留柱，棄去收集
管中的過濾液，將柱重新放入收集管。
（四）漂洗
4．加入 700 μl Buffer KW1, 室溫下 13,000 rpm 離心 30s，棄去收集管中
的過濾液，保留柱。
5. 加入 700 μl Buffer KW1, 室溫下 13,000 rpm 離心 30s，棄去收集管中
的過濾液，保留柱。注意： Buffer KW 在使用之前必須加入 50 ml 無水乙
醇，并置于室溫下。
6. (可選): 加入 700 μl 的 70%的乙醇溶液（自備），室溫下 13,000 rpm 離
心 30s，棄去收集管中的過濾液，保留柱。（此步驟不是必須的，但是 70% 的
乙醇漂洗可能有益于提高 DNA 純度）
7. 棄收集管中的濾液，將空柱子套回 2 ml 收集管內(nèi)。室溫下，高轉(zhuǎn)速
離心 2 min 以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。 （注意：省去這一步將導(dǎo)致殘留
乙醇于 DNA 中）
（五）洗脫
8. 把柱子裝在一個干凈的 1.5 ml 離心管上，加入 50 μl 的 KE (或者用
滅菌的 TE 10 mM tris-HCl, pH 8.0 或純水代替，純水可能影響 DNA 洗脫效
率)，65℃放置 5-10 min, 13,000 rpm 離心 1min 以洗脫 DNA。(也可以將 KE
預(yù)熱至 65℃，再加至膜上，可以減少放置時間至 1min）
注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中間部位，并確保液體將膜全部覆蓋。
9. DNA 應(yīng)保存于 4 ℃，若長時間保存，可凍存于-20 ℃。

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